Mise au point de techniques de microscopie pour la visualisation de mycètes au niveau des semences
| Titre | Mise au point de techniques de microscopie pour la visualisation de mycètes au niveau des semences |
| Type | Rapport de stage |
| Auteurs | Archer Claire |
| Directeurs | Guillemette Thomas, Belmas Elodie |
| Année | 2017 |
| URL | http://dune.univ-angers.fr/fichiers/14003604/20173MABTV7659/fichier/7659F.pdf |
| Mots-clés | agents pathogènes, Alternaria brassicicola, Arabidopsis thaliana, microscopie, semences |
| Résumé | La maladie des tâches noires, causée par le champignon nécrotrophe Alternaria brassicicola, est responsable de pertes de rendement chez les Brassicacées cultivées (chou, colza, moutarde). La transmission à et par les semences est une étape cruciale du cycle de développement de ce champignon. Cette étape de transmission est étudiée dans l’équipe FungiSem via le pathosystème modèle Alternaria brassicicola / Arabidopsis thaliana. Les études antérieures en microscopie ont montré la présence d’un mycélium entourant les graines ainsi que des points de pénétration. Néanmoins, l’impact et la localisation en profondeur du mycète dans les tissus sont peu étudiés. Nous avons travaillé à la mise au point d’un mode opératoire permettant d’obtenir des coupes fines de graines d’A. thaliana, contaminées par une souche pathogène (Abra43) ou par une souche saprophyte (Alternata 42) à différents stades de développement. La réalisation des coupes est un réel challenge technique du fait de la fragilité des tissus de la graine. Des coupes de bonne qualité ont pu être obtenues mais les étapes ultérieures d’analyses (notamment la coloration fongique) ont porté atteinte à leur intégrité. Nous proposons de nous affranchir de cette étape par l’utilisation de souches marquées constitutivement par des protéines fluorescentes. Grâce à l’obtention de ces coupes fines couplée à une observation en microscopie confocale à balayage laser, nous espérons améliorer les connaissances sur la localisation du champignon dans les tissus de la graine. |
| Résumé en anglais | The black spot disease, due to Alternaria brassicicola, a necrotrophic fungus, is a disease inducing economic problems on cultivated Brassicaceae (cabbage, rapeseed, mustard). Transmission to and by the seeds is a crucial step in the development cycle of this fungus. This stage of transmission is studied in the FungiSem team and is based on the Alternaria brassicicola / Arabidopsis pathosystem. Previous studies in microscopy have shown the presence of a mycelium surrounding the seeds as well as penetration points. However, the impact and the deep location in the tissues is under-studied. We have worked on the development of procedure for obtaining thin sections of A. thaliana seeds, contaminated with a pathogenic strain (Abra43) or with a saprophytic strain (Alternata 42), at different stages of development. The realization of the cuts is a technical challenge due to the fragility of seed tissues. High quality sections have been obtained but further analysis steps (especially staining step) have undermined their integrity. We propose to overcome this step by using strain marked by fluorescent proteins. Thanks to the obtaining of this thin sections linked with an observation in confocal laser scanning microscopy we hope to improve the knowledge on fungi location in seed tissues. |
| Langue de rédaction | Français |
| Nb pages | 20 |
| Diplôme | Master Biologie Végétale |
| Date de soutenance | 2017-06-28 |
| Editeur | Université Angers |
| Place Published | Angers |
| Entreprise | IRHS - Equipe FungiSem |
| Tuteur | M. Grégory MONTIEL |
| Libellé UFR | UFR de Sciences |