Mise en place de la quantification d'ADN mitochondrial par qPCR quadruplex
| Titre | Mise en place de la quantification d'ADN mitochondrial par qPCR quadruplex |
| Type | Mémoire de Diplôme universitaire de technologie (DUT) |
| Auteurs | Desclos de la Fonchais Pierre-Joseph |
| Directeurs | Cimon Bernard |
| Année | 2015 |
| URL | http://dune.univ-angers.fr/fichiers/20132296/2015IUTGB4143/fichier/4143F.pdf |
| Mots-clés | ADN mitochondrial, délétion, déplétion, mitochondrie, qPCR Taqman quadruplex |
| Date de soutenance | 2015-06-24 |
| Résumé | Les maladies mitochondriales s’expriment sous de nombreuses formes phénotypiques mais conduisent le plus souvent à un déficit énergétique. Elles peuvent être liées à des mutations dans l’ADN nucléaire (dans les gènes codant des complexes de la chaîne respiratoire ou dans des gènes importants pour la maintenance de l’ADN mitochondrial) ou à des mutations de l’ADN mitochondrial. Cette hétérogénéité génétique rend très difficile le diagnostic des cytopathies mitochondriales. Les anomalies de l’ADN mitochondrial peuvent être des mutations ponctuelles mais également des délétions (partie de l’ADN manquante) ou des déplétions (diminution de la quantité de molécules d’ADN mitochondrial). La quantification de l’ADN mitochondrial est réalisée dans la plupart des centres de diagnostic par une technique de PCR quantitative utilisant le SYBRGreen (un intercalant de l’ADN). Cette technique présente cependant l’inconvénient d’être assez peu répétable entre les centres et utilise une quantité d’ADN importante. Durant ce stage, j’ai mis au point une technique de qPCR en multiplex (Taqman) permettant de quantifier dans un même puits les gènes mitochondriaux et nucléaires dans le but d’augmenter la spécificité et la sensibilité de cette quantification. |
| Résumé en anglais | Mitochondrial diseases are disorders with heterogeneous phenotypical forms and often lead to an energetic deficiency due to respiratory chain dysfunction. They can be linked either to mutations in nuclear genes (encoding respiratory chain complexes subunits or protein involved in mitochondrial DNA maintenance) or in mitochondrial DNA (mtDNA). The diagnosis of mitochondrial diseases is often diffult to establish because of this genetic heterogeneity. Mitochondrial DNA abnormalities can be mutations, deletions (shorter mtDNA missing several genes) or depletion (decrease of the quantity of mtDNA molecules). In the majority of diagnosis centers., the quantity of mtDNA molecules is measured by SYBRGreen (DNA intercalator) based quantitative PCR. However, this technique has the disadvantage of the experiments not being repeatable between the centers and of the important quantity of DNA to use. During this placement, I have set up a multiplex quantitative PCR technique based on probe hydrolysis (Taqman). It would allow to quantify in a same well the level of both mitochondrial and nuclear genes with the goal to increase the specificity and sensibility of the method. |
| Langue de rédaction | Français |
| Nb pages | 37 |
| Diplôme | DUT Génie biologique |
| Editeur | Université Angers |
| Place Published | Angers |
| Libellé UFR | Institut Universitaire de Technologie |