Le couple de récepteurs NLR RGA4/RGA5 du riz reconnaît l’effecteur AVR-Pia de Magnaporthe oryzae pour déclencher une réponse hypersensible (HR). Ce travail visait à identifier les interactions inter-domaines impliquées dans l’immunité en étudiant les domaines canoniques (CC, NB-ARC, LRR) isolés. Les frontières des domaines ont été redéfinies par modélisation Alphafold 3, et des fragments de différentes tailles des domaines isolés de RGA4 et Sr33 (témoin négatif) ont été clonés via Golden Gate et exprimés chez Nicotiana benthamiana. Le Western blot a confirmé l’expression de la majorité des domaines, à l’exception des LRR N-terminaux. L’évaluation de l’HR a montré que les domaines CC isolés de RGA4 n’induisent pas de mort cellulaire, suggérant un besoin de conformation inter-domaine. Le CC de Sr33 a déclenché une HR modérée. En co-immunoprécipitation (Co-IP) sous faible stringence, des interactions CC–CC (RGA4/RGA4) et CC RGA4–RGA5 ont été observées, mais aussi des liaisons aspécifiques avec Sr33. En forte stringence, ces interactions disparaissent, indiquant un compromis entre affinité et spécificité. Pour les domaines NB-ARC et LRR, des interactions RGA4–RGA5 et RGA5–Sr33 ont persisté, mais la signalisation résiduelle avec Sr33 suggère une absence de spécificité ou un défaut de contrôle.
The RGA4/RGA5 NLR receptor pair of rice recognizes the AVR-Pia effector of Magnaporthe oryzae to trigger a hypersensitive response (HR). This work aimed to identify the inter-domain interactions involved in immunity by studying the isolated canonical domains (CC, NB-ARC, LRR). Domain boundaries were redefined by Alphafold 3 modeling, and fragments of different sizes of the domains isolated from RGA4 and Sr33 (negative control) were cloned via Golden Gate and expressed in Nicotiana benthamiana. Western blot confirmed expression of the majority of domains, with the exception of N-terminal LRRs. HR assessment showed that CC domains isolated from RGA4 did not induce cell death, suggesting a requirement for inter-domain conformation. Sr33 CC triggered moderate HR. In co-immunoprecipitation (Co-IP) under low stringency, CC-CC (RGA4/RGA4) and CC RGA4-RGA5 interactions were observed, but also aspecific binding to Sr33. At high stringency, these interactions disappear, indicating a compromise between affinity and specificity. For the NB-ARC and LRR domains, RGA4-RGA5 and RGA5-Sr33 interactions persisted, but residual signaling with Sr33 suggests a lack of specificity or a control defect.