Chez Orobanche cumana, plante parasite du tournesol, la germination dépend de la détection de signaux provenant de l’hôte, en particulier les strigolactones (SL) et sesquiterpènes lactones (SqTL). L’étude du complexe de signalisation KAI2d-MAX2-SMXL, bien défini chez Arabidopsis thaliana, semble essentiel à cette réponse. L’étude de ce complexe chez O. cumana a nécessité : l’extraction d’ARN et d’ADN génomique de graines conditionnées, l’amplification des gènes MAX2 et SMXL par PCR, leur clonage dans des plasmides et la validation des constructions par digestion enzymatique et séquençage. Le gène SMXL2.2 a été amplifié en fragments recouvrants, afin de réaliser la stratégie Gibson assembly®, en raison de leur faible expression et de leur complexité structurale. Les résultats montrent que la protéine MAX2 est très conservée entre deux populations d’O. cumana, tandis que les SMXL présentent une diversité marquée dans leur nombre avec notamment des isoformes multiples dans la sous-famille SMXL2. Les SMXL semblent exprimés de manière transitoire après exposition aux GS, comme le confirment les profils RNA-seq. Certaines variantes de SMXL pourraient être recrutées préférentiellement selon le type de récepteur KAI2d activé et selon le type de stimulant de germination. Des essais d’interaction protéique en système double hybride en levure sont en cours pour caractériser les relations MAX2–KAI2d–SMXL. Ces interactions semblent dépendre du ligand perçu (SL ou DCL), suggérant une spécificité d’assemblage du complexe selon l’environnement chimique
In Orobanche cumana, a sunflower-specific parasitic plant, germination strictly depends on the perception of host-derived signals, particularly strigolactones (SL) and sesquiterpene lactones (SqTL). The signaling complex KAI2d–MAX2–SMXL, well-characterized in Arabidopsis thaliana, appears to play a key role in this response. Investigating this pathway in O. cumana required RNA and genomic DNA extraction from conditioned seeds, PCR amplification of MAX2 and SMXL genes, cloning into plasmid vectors, and validation of the constructs through enzymatic digestion and sequencing. The SMXL2.2 gene was amplified with overlapping fragments for Gibson Assembly®, due to its low expression level and structural complexity. Results show that the MAX2 protein is highly conserved across O. cumana populations, whereas the SMXL family exhibits notable diversity, especially with multiple isoforms in the SMXL2 subfamily. SMXL transcripts appear to be transiently expressed after exposure to germination stimulants (GS), as confirmed by RNA-seq data. Certain SMXL variants may be preferentially recruited depending on the activated KAI2d receptor and the type of germination stimulant involved. Yeast two-hybrid assays are currently undergoing to characterize interactions between MAX2, KAI2d receptors, and SMXL isoforms. Preliminary observations suggest that these interactions are ligand-dependent (SL or DCL), supporting the hypothesis of a signal-specific assembly of the signaling complex in response to the surrounding chemical environment.